биохимия

ПРАКТИКУМ

Опыт 1. Отношение аминокислот к индикаторам

Реактивы и оборудование: 1% раствор глицина, 1% раствор аланина, универсальная индикаторная бумага.

Выполнение опыта: определите с помощью индикаторной бумаги значение рН растворов глицина и аланина. Какая реакция данных растворов?

Ход реакции:

         ..                                       +                                               + H

     H2N    CH2 COOH                H3N       CH2        COO-            2O    NH2        CH2      COO- + H3O+

                                                                биполярный ион                                                   

Раствор глицина имеет слабокислую реакцию среды (рН ~ 6,1), т.к. в биполярном ионе кислотность –NН₃⁺ группы несколько больше основности группы —СОО^-.

Опыт 2. Амфотерные свойства аланина

Реактивы и оборудование: 1% раствор аланина, 0,1% раствор соляной кислоты с индикатором конго, 0,1% раствор гидроксида натрия с фенолфталеином, 2 пробирки, водяная баня, электрическая плитка.

Выполнение опыта: в первую пробирку внесите 10 капель раствора аланина и добавьте 2-3 капли раствора соляной кислоты с индикатором конго. Отметьте изменение окраски индикатора от синей до розово-красной. Появление окраски можно ускорить, нагрев пробирку. 

Во вторую пробирку внесите 10 капель раствора аланина и добавьте по каплям раствор гидроксида натрия с фенолфталеином. Отметьте изменение окраски – исчезновение малиновой. Почему изменяется окраска индикатора? Ход реакции:

                    CH₃CH  COOH + HCl CH   COOH  Cl^-

N+ H3

N..H₂

                                _аланин                                                    хлорид

α – аминопропионовой кислоты  

            CH₃          CH      COOH + NaOH   CH     COO^- Na⁺ + H₂O

                          NH₂                                                                                                   NH₂

               натриевая соль

                                                                                 α – аминопропионовой кислоты                    

Опыт 3. Реакция α – аминокислот с нингидрином

Данная реакция является качественной реакцией на α – аминокислоты.

Реактивы и оборудование: 1% раствор глицина, 0,1% раствор нингидрина, 1 пробирка, водяная баня, электроплитка.

Выполнение опыта: в пробирку внесите 10 капель раствора глицина и добавьте 2-3 капли раствора нингидрина. Через несколько минут наблюдается появление фиолетовой окраски. Появление окраски можно ускорить, нагрев пробирку. Ход реакции:

O

N         C             + CO₂ + H  C           + 3H₂O H

OH

      нингидрин                        глицин                                        продукт реакции

                                                                                сине-фиолетового цвета                                                

Опыт 4. Образование комплексных солей меди (II)

Реактивы и оборудование: 1% раствор глицина, карбонат меди (II) (СuCO₃), 2н раствор гидроксида натрия (NaOH), 1 пробирка, водяная баня, электрическая плитка.

Выполнение опыта: в пробирку внесите 20 капель раствора глицина, добавьте на кончике лопаточки карбоната меди (II) и нагрейте. 

К полученному раствору прибавьте 2 капли щелочи.  Ход реакции:

2 CH

NH₂

комплексная хелатная

                                                                              соль меди                    

Выпадение осадка гидроксида меди (II), как это наблюдается с обычными солями меди, не происходит.

Из этого следует сделать вывод, что при действии глицина на соль меди (II) образуется не обычная медная соль, а комплексное хелатное соединение (от греч. слова hela – клешня), в котором атом меди связан не только с атомом кислорода гидроксила, но и с атомом азота аминогруппы. 

Опыт 5. Реакция аминокислот с азотистой кислотой

Реактивы и оборудование: 1% раствор глицина, раствор нитрита натрия (NaNO₂), концентрированная соляная кислота (HCl), 1 пробирка.

Выполнение опыта: в пробирку внесите 5 капель раствора глицина и 5 капель нитрита натрия. Добавьте 2 капли концентрированной соляной кислоты и осторожно взболтайте. Наблюдается выделение пузырьков газа и образование оксикислоты.

Ход реакции:

                                              NaNO₂ + HCl                      HNO₂ + NaCl   

                        CH     COOH + HNO₂                                              COOH + N₂    + H₂O  

NH₂

                                                                                  гликолевая кислота                 

Опыт 34. Реакция аминокислот с формальдегидом (муравьиным альдегидом)

Данная реакция лежит в основе метода формольного титрования (метод Серенсена) и используется для количественного определения карбоксильных групп в α – аминокислотах.

Реактивы и оборудование: 1% раствор глицина, индикатор метиловый оранжевый, раствор формальдегида.

Выполнение опыта: в пробирку внесите 10 капель раствора глицина и 1 каплю индикатора метиловый оранжевый. Добавьте 5 капель формальдегида. 

Ход реакции:

производное глицина  

Опыт 6. Биуретовая реакция

Биуретовая реакция обусловлена наличием в соединениях пептидной группировки (—СО—NН—). Эту цветную реакцию с солями меди в щелочной среде дают биурет, амиды и имиды кислот, пептиды и белки. Окрашенные продукты реакции являются комплексами.

Реактивы и оборудование: 1% раствор белка, 0,2н раствор сульфата меди (CuSO₄), концентрированный гидроксид натрия (NaOH), 1 пробирка.

Выполнение опыта: в пробирку внесите 5 капель раствора белка и добавьте 5 капель гидроксида натрия и 1 каплю раствора сульфата меди.  Ход реакции:

Опыт 7. Ксантопротеиновая реакция

Данная реакция является качественной реакцией на ароматические аминокислоты.

Реактивы и оборудование: 1% раствор белка, концентрированная азотная кислота (HNO₃), концентрированный гидроксид натрия (NaOH), 1 пробирка, водяная баня, электроплитка.

Выполнение опыта: в пробирку внесите 5 капель раствора белка и добавьте (осторожно!) 3 капли концентрированной азотной кислоты. Содержимое нагрейте до образования желтой окраски. Пробирку охладите и добавьте, не взбалтывая приборку, 2-3 капли концентрированного гидроксида натрия.  Ход реакции:

to

                     HO                                  CH   COOH + HO   NO₂      

NH₂

                                                     тирозин                                                        

                                                          нитротирозин (желтая окраска)                      

                                                                           оранжевая окраска                   

Опыт 8. Буферные свойства раствора белка

Реактивы и оборудование: 1% раствор белка, раствор соляной кислоты с индикатором конго, раствор гидроксида натрия с фенолфталеином, 2 пробирки.

Выполнение опыта: в первую пробирку внесите 10 капель раствора белка и постепенно по каплям прибавьте раствор соляной кислоты с индикатором конго. Отметьте изменение окраски раствора по мере постепенного добавления избытка кислоты с конго. 

Во вторую пробирку внесите 10 капель раствора белка и добавьте постепенно по каплям раствор гидроксида натрия с фенолфталеином. Отметьте окраску раствора при добавлении избытка щелочи. 

Почему не сразу изменяется окраска индикатора?

Ход реакции:

R

                                     COO^-                                          COO^-                                               COOH

                        в щелочной среде       в изоэлектрической               в кислой среде

                                                                            точке                                         

Белок в растворе проявляет буферные свойства, т.е. может связывать как появляющиеся водородные, так и гидроксильные ионы. По мере добавления определенного объема раствора кислоты или щелочи окраска индикатора конго переходит от красной к синей, а розовая окраска фенолфталеина исчезает. По мере добавления избытка реагента окраска индикаторов восстанавливается.

Скачано с www.znanio.ru