Методические указания к практическому занятию по дисциплине

«Основы микробиологии и иммунологии»

для студентов специальности: Фармация; 060300, 060301  

Тема: «Иммунодиагностика инфекционных заболеваний (реакции агглютинации) ».

Цель занятия: Изучить методику постановки ориентировочной и развернутой реакций агглютинации.

Оборудование:  предметные стекла, сыворотка, изотонический раствор, петли, культура микроорганизмов.

После выполнения практической работы студенты должны уметь:

- учитывать результат серологической реакции.

Студенты должны знать:

- применение серологических реакций;

-механизм взаимодействия антигена и антител

Практическая работа способствует формированию следующих профессиональных компетенций:

ОК- 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес;

ОК-3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК-4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и личностного развития.

ОК-6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством.

ОК-7. Брать на себя ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результатом выполнения заданий.

План занятия

I. Входной контроль

II. Инструктаж к практической работе. Демонстрация манипуляций по теме.

III. Самостоятельная работа студентов. Оформление дневников по практике

IV. Отчет о проделанной работе. Выходной контроль

Ход занятия.

I.       Ответьте на вопросы входного контроля:

1. Какие реакции называются серологическими?

2. С какой целью применяют серологические реакции?

3.На чем основана реакция агглютинации?

4.Какие существуют методы проведения реакции агглютинации?

5.Из скольких фаз складывается процесс взаимодействия антигена и антитела?

II.   Инструктаж к практической работе

Используя в работе   методические указания, изучите постановку реакций агглютинаций.

III. Самостоятельная работа студентов:

1.       Изучить методику постановки реакции  агглютинации на стекле.

1.       На обезжиренное  предметное стекло нанести две капли специфической (адсорбированной) сыворотки и одну каплю изотонического раствора на некотором расстоянии друг от друга. Восковым карандашом пометить, где какая капля.

2.       Культуру микроорганизмов тщательно растереть на стекле петлей. Внести в каплю изотонического раствора и в одну из капель сыворотки, размешивая в каждой до образования однородной взвеси. Капля сыворотки, в которую не внесена культура, является контролем сыворотки. Капля изотонического раствора, в которую внесена культура, является контролем антигена.

3.       Реакция протекает при комнатной температуре 1-3 минуты. Контроль сыворотки остается прозрачным, а в контроле антигена должна наблюдаться равномерная муть.

4.       Учет результатов реакции:

А) Если в капле, где культура смешана с сывороткой, появляются хлопья агглютината на фоне прозрачной жидкости – реакция положительная.

Б) Если в капле будет равномерная муть, как в контроле антигена – реакция – отрицательная.

Примечание: реакция отчетлива вида, если рассматривать на темном фоне.

2.       Изучить методику постановки развернутой реакции агглютинации.

1.       Разведение сыворотки.

А) Поставить в штатив  7 пробирок одинакового диаметра и высоты.

Б) на каждой пробирке указать степень разведения сыворотки. На пробирках написать «КС» - контроль сыворотки и «КА» - контроль антигена.

В) Во все пробирки налить по 1 мл изотонического раствора.

Г) В отдельной пробирке приготовить исходное  (рабочее) разведение сыворотки. Например, для приготовления рабочего разведения 1:50, в пробирку наливают 4,9 мл изотонического раствора NaCl  и 0,1 мл сыворотки. На пробирке обязательно указать степень разведения. Исходное  (рабочее) разведение вносят в первую  пробирки и в пробирку контроля сыворотки.

Д) Приготовить последовательные двукратные разведения сыворотки.

Таблица  1 – Схема разведения сыворотки

Примечание: Стрелки указывают перенос жидкости из одной пробирки в другую. Из 5-й пробирки и пробирки контроля сыворотки 1,0 мл выливают в дезинфицирующий раствор.

Е) Все пробирки, кроме контроля сыворотки, внести по 1-2 капли антигена (свежеприготовленной взвеси бактерий). В пробирках при этом появляется небольшая равномерная муть. Контроль сыворотки остается прозрачным.

Ж) пробирки тщательно встряхнуть и поместить в термостат (37⁰С). Предварительный учет результатов реакции производят через 2 часа, а окончательный  - спустя 18-20 часов (выдерживая при комнатной температуре).

2.Учет результатов.

А) Контроль сыворотки должен оставаться прозрачным, а контроль антигена – мутным.

Пробирки просматривают в проходящем свете (очень удобно на темном фоне) невооруженным глазом. При положительном результате реакции в пробирках видны зерна или хлопья агглютината.

Б) Интенсивность реакции выражается следующим образом.

IV.   Выходной контроль. Тестовый опрос.

Методические рекомендации студентам к практическому занятию

по теме: «Иммунодиагностика инфекционных заболеваний (реакции агглютинации)».

1. Какие реакции называются серологическими?

2. С какой целью применяют серологические реакции?

3.На чем основана реакция агглютинации?

4.Какие существуют методы проведения реакции агглютинации?

5.Из скольких фаз складывается процесс взаимодействия антигена и антитела?