Принципы лабораторной диагностики гепатита С

Принципы лабораторной диагностики гепатита С Вирус гепатита С (ВГС, HCV) относится к семейству Flaviviridae, роду Hepacivirus, был идентифицирован в 1989 г. Морфология.  Вирус   гепатита   С   ­   сложноорганизованный   вирус сферической формы, диаметром 55­65 нм, содержащий однонитевую плюс­ РНК. Имеет суперкапсид, построенный по кубическому типу симметрии. ВГС содержит   структурный   белок   сердцевины   (core),   НСс­антиген   и неструктурные   белки­ферменты   ­   NS2,   NS3,   NS4,   NS5,   необходимые   для репродукции вируса. NS2 и NS4 принимают участие в процессинге NS­района, синтезированного   в   результате   трансляции   вирусной   РНК   полипептида. Бифункциональный   белок   NS3   обладает   протеолитической   и   хеликазной активностью. Белок NS5 является РНК­зависимой РНК­полимеразой.  Капсид вируса окружен липопротеиновой оболочкой с гликопротеиновыми шипами gp El и gp E2/NS1.  Антигенная структура. Выделяют следующие антигены: НСс ­ антиген (core­антиген); неструктурные белки NS2­NS5; гликопротеины оболочки gp El и   gp   E2/NS1.   причем   особой   Геном   ВГС   высокоизменчив, гипермутабельностью   обладает   участок,   детерминирующий   синтез гликопротеинов   Е1   и   Е2,   которые   обладают   В­эпитом   и   некоторые вырабатываются вируснейтрализующие антитела. При замене аминокислот в гликопротеинах   изменяются   антигенные   свойства   вируса,   позволяя   ему избегать нейтрализующего действия антител. Известно около  14 генотипов вируса среди которых выделяют 6 основных, клинически значимых, и около 100 субтипов. Наиболее распространены генотипы 1­3, наиболее вирулентным является генотип 1b, преобладающий в России [3]. Культуральные   свойства.  ВГС   не   культивируется   на   куриных эмбрионах, не обладает гемолитической и гемагглютинирующей активностью. Экспериментальная   модель   ­   шимпанзе.   Вирус   трудно   адаптируется   к культивированию в культуре клеток.  Резистентность.  Устойчивость   вируса   во   внешней   среде   невелика, однако   в   инфицированной   сыворотке   крови   может   сохранять жизнеспособность  несколько лет. ВГС чувствителен  к эфиру, детергентам, формальдегиду, УФ­лучам; нагревание при температуре 60°С инактивирует вирус в течение 10 ч, при 100°С в течение 2 мин. По резистентности занимает промежуточное положение между более устойчивым вирусом гепатита В и менее устойчивым вирусом иммунодефицита человека. Эпидемиология.  Источник   инфекции   –   люди   с   бессимптомной, манифестной   и,   особенно   хронической   формой   инфекции.   Основным механизмом передачи является парэнеральный, в меньшей степени ­ половым, вертикальным   и   крайне   редко   ­   бытовым   путём.   Таким   образом,   ВГС передается   так   же,   как   и   вирус   гепатита   В,   но   для   заражения   вирусом гепатита С требуется большая заражающая доза, чем при гепатите В.  В группе риска   находятся, в первую очередь, шприцевые наркоманы, использующие общий шприц (70%  и более случаев заражения). Также риску инфицирования   подвергаются   люди,   которым   регулярно   переливают донорскую кровь и препараты крови. Иногда заражение может происходить при трансплантации органов, после повторных процедур гемодиалица и др. медицинских манипуляций при нарушении техники безопасности и высокой вирусемии. Медицинские работники, постоянно контактирующие с кровью, тоже находятся в группе риска. Половой путь передачи составляет 5­10% инфицированных [3]. Клиническая   картина.  Инкубационный   период   ВГС   составляет   6­8 недель. Клиническое течение острого гепатита С боле легкое, чем гепатита В. Часто может протекать в субклинической форме, выявить заболевания при которой   можно   при   повышении   в   крови   активности   аланинамино­ грансаминазы.   Однако   в   70%   случаев   у   больных   развивается   хронический гепатит, осложняющийся во многих случаях циррозом печени или гепатомой. В 50% случаев переход в хроническое состояние связан, с одной стороны, с отсутствием   выраженного   СD4­клеточного   иммунного   ответа,   а   также возможность вируса избегать нейтрализующего действия антител вследствие большой изменчивости вирусного генома. Предположительно ВГС является персистирующей   вирусной   инфекцией,   при   которой   вирус   персистирует   в лимфоузлах.   Ослабление   СD4­иммунного   ответа   приводит   к   реактивации вируса, а выраженный СD4­иммунный ответ, направленный против эпитопа на NS З­белке, обусловливает выздоровление.  Диагностика.  Лабораторная диагностика базируется на обнаружении антигена   или   противовирусных   антител   путем   иммуноферментативного анализа или др. методами. Антитела выявляются на поздних стадиях болезни, однако в серонегативный период в крови больных обнаруживается антиген ВГС [2]. Для диагностики используются полимеразная цепная реакция (ПЦР) и серологическое исследование. Материалом для проведения исследования является   кровь.   Обнаружение   в   крови   РНК   вируса   возможно   уже   через несколько дней после заражения, а появление антител к ВГС наблюдается только   через   12   недель,   создавая   окно   серонегативности   и   потенциальной инфекционности.   Поэтому   ПЦР   является   методом   выбора   для   ранней диагностики вируса. Методом ПЦР устанавливается генотип и подтип вируса, а   также   концентрация   вируса   в   крови.   Количественная   ПЦР   позволяет оценивать активность инфекционного процесса, его прогноз и эффективность лечения, но массового характера еще не приобрела [3]. Целью   серологического   исследования   является   обнаружение специфических   антител   в   исследуемой   сыворотке   с   помощью   ИФА. Первоначально   проводтся   скрининг­исследование   для   обнаружения   общих антител   ­   анти­HCV­total  с   использованием   тест­системы   ИФА   третьего поколения,   в   которой   в   качестве   антигена   применяют   иммунореактивные синтетические   пептиды.   Эти,   так   называемые,   ориентировочные   реакции   Определение   срока позволяют   установить   факт   инфицирования. инфицирования, прогрессирования инфекции предполагает исследования на наличие специфических антител класса IgM, используя ИФА. Их обнаружение говорит   об   острой   стадии   инфекции   или   обострении   хронической   формы  Для   подтверждения   диагноза   используют   метод гепатита   С  [3]. иммуноблотинга. Профилактика и лечение.  Неспецифическая профилактика включает те же мероприятия, что и при гепатите В, для лечения применяют интерферон и рибовирин. Способы специфической профилактики не разработаны [5]. Список источников информации 1.   Алехин   Е.   К.   Как   действуют   антибиотики.   Соросовский образовательный журнал, том 6, №4, 20. – с. 19­23  2.   Борисов   Л.   Б.   Медицинская   микробиология,   вирусология, иммунология: учебник для вузов по медицинским специальностям. – 4­еизд., доп. и перераб. – М.: Медицинское информационное агентство, 2005. – 734 с. 3. Медицинская вирусология. Часть 2. Частная вирусология. Учебно­ методическое пособие под общ. редакцией Горячкиной Н. С., Кафарской Л. И. М.: Российский Государственный медицинский Университет, Московский факультет РГМУ, 2011. ­ 183 с. 4. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.  Коротяев А.И., Бабичев С.А. ­ 4­е изд., испр. и доп. СПб.: СпецЛит, 2008. ­  767 с. 5. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник/ Под   ред.   В.В. Зверева,   А.С.   Быкова.   —   М.:   ООО   «Издательство «Медицинское информационное агентство», 2016. — 816 с. 6.   Решедько   Г.   К.   Определение   чувствительности   к   антибиотикам: методы, результаты, оценка.  ­ [Электронный ресурс] – Режим для доступа: http://www.antibiotic.ru/rus/all/articles/absens.shtml  обращения 24.02.2019).  (Дата   последнего