Физиология растений - Ферменты дыхания

Вопрос 2. Путь фотосинтеза растений (цикл Кальвина) Первый   метод,   использованный   Кальвином,­   метод   радиоактивного углерода. Радиоактивные изотопы по химическим свойствам практически не отличаются   от   стабильных.   Принимая   участие   в   реакциях,   они   как   бы помечают те соединения, в которые входят. Скорость распада радиоактивных изотопов   пропорциональна   их   количеству.   Излучение,   испускаемое   ими   в процессе   разложения,   может   быть   легко   измерено.   Все   это   создает возможность   использования   метода   радиоактивных   изотопов   при   изучении химизма фотосинтеза. Второй метод ­ хроматография на бумаге. Если вещества, разогнанные на хроматограмме, содержат радиоактивные атомы, то их легко обнаружить с помощью радиоавтографии. Применяя указанные методы и короткие световые экспозиции можно определить, какие вещества и в какой последовательности образуются из 14С02. В качестве объекта исследований была взята зеленая водоросль   хлорелла.   После   кратковременных   экспозиций   на   свету   в присутствии   14СО,   растения   фиксировались   горячим   спиртом.   Спиртовой экстракт   концентрировался,   разделялся   хроматографически   и анализировался.   Опыты   показали,   что   через   5   с   пребывания   в   атмосфере 14С02 на свету большая часть радиоактивного углерода сосредоточивается в трехуглеродном   соединении   ­   3­фосфоглицериновой   кислоте   (3­ФГК). Кальвин   выдвинул   предположение,   что   в   хлоропластах   имеется   какое­то вещество­акцептор,   образует фосфоглицериновую   кислоту   (акцептор   +   С02   ­   >   ФГК).   Для   того   чтобы   взаимодействуя   с   С02,   которое, установить   природу   акцептора,   была   проведена   серия   опытов   с изменяющимися внешними условиями (смена света и темноты в присутствии и в   отсутствие   14С02).   Оказалось,   что   после   выключения   света   содержание ФГК некоторое время продолжает расти. Одновременно наблюдалось быстрое исчезновение пятиуглеродного соединения ­ рибулезо­1,5­бифосфата (РБФ). Через 30 с РБФ не обнаруживался, а количество ФГК не изменялось. Вместе с тем на свету РБФ не исчезал, и его содержание оставалось постоянным. Иная картина наблюдалась в отсутствие С02. В этом случае ни в темноте, ни на свету содержание РБФ не изменялось. Из полученных данных следовало, что в присутствии углекислого газа РБФ в темноте используется для образования ФГК. Дальнейшие превращения ФГК требуют света. В силу этого Кальвин выдвинул схему процесса фотосинтеза: Превращение РБФ в ФГК Согласно этой схеме РБФ является акцептором, который присоединяет С02,   в   результате   чего   образуется   ФГК.   Однако   в   отсутствие   света   РБФ быстро   оказывается   использованным   и   исчезает.   При   этом   накапливается известное количество ФГК. Именно это и наблюдалось в эксперименте. На свету при участии продуктов световой фазы происходит восстановление ФГК до фосфоглицеринового альдегида (ФГА). Судьба образовавшихся молекул ФГА   различна.   Частично   путем   ряда   превращений   ФГА   используется   на регенерацию   акцептора   (РБФ).   Для   процесса   регенерации   РБФ   также необходима АТФ, образовавшаяся в световой фазе. В силу этого количество РБФ   на   свету   поддерживается   на   постоянном   уровне.   В   каждом   цикле принимают участие три молекулы акцептора (РБФ) и образуется 6 молекул триозы (ФГА). Пять молекул ФГА идет на регенерацию акцептора через ряд промежуточных продуктов. Каждая шестая молекула ФГА выходит из цикла и используется для построения углеводов и других метаболитов.  Цикл Кальвина можно разделить на фазы. Первая   фаза   ­карбоксилирование.   Эта   реакция   катализируется специфическим  для процесса  фотосинтеза ферментом рибулозобисфосфат­ карбоксилазой/   оксигеназой.   Особенностью   фермента   является   то,   что катализируемая   им   реакция   является   самой   медленной   стадией   в   цикле фиксации   углекислоты.   В   активное   состояние   фермент   переходит   при освещении хлоропластов. Уже отмечалось, что формирование этого фермента происходит   под   контролем   двух   геномов:   большие   субъединицы   (54   кДа) кодируются   в   ядре,   синтезируются   в   цитоплазме;   малые   ­   кодируются   и синтезируются   в  хлоропласте.  При  взаимодействии   РБФ  с  С02  образуется сначала   промежуточное   нестойкое   шестиуглеродное   соединение,   которое затем   распадается   на   две   молекулы   ФГК.   Образовавшаяся   ФГК   ­   это органическая   кислота,  и   ее  энергетический   уровень   ниже   уровня   Сахаров. Поэтому это соединение не может непосредственно превращаться в углеводы. Необходимо превращение его в трехуглеродный сахар ­ фосфоглицериновый альдегид (ФГА). Вторая фаза ­ восстановление. Дальнейшие превращения ФГК требуют участия   продуктов   световой   фазы   фотосинтеза:   АТФ   и   НАДФН   +   Н+. Реакция   идет   в   два   этапа.   Прежде   всего,   происходит   реакция фосфорилирования 3­ФГК. Донором фосфатной группы является АТФ. АТФ требуется здесь в качестве дополнительного источника энергии. Образуется 1,3­дифосфоглицериновая   кислота.   Реакция   катализируется   ферментом фосфоглицерокиназой: Фосфорилирования 3­ФГК Образовавшееся   в   этой   реакции   соединение   ­   дифосфоглицериновая кислота     обладает   более   высокой   реакционной   способностью,   содержит макроэргическую   связь,   полученную   от   АТФ.   Затем   карбоксильная группировка этого соединения восстанавливается до альдегидной с помощью триозофосфатдегидрогеназы, коферментом которой служит НАДФ. Образовавшийся ФГА является по уровню восстановленным углеводом. Это   соединение   вступает   в   две   последние   фазы.   Пять   молекул   ФГА используется на регенерацию акцептора РБФ для того, чтобы фиксация С02 могла снова осуществляться. Оставшаяся шестая молекула вступает в фазу «синтеза   продуктов»,   где   превращается   в   более   сложные   соединения (углеводы, аминокислоты). Третья   фаза   ­   регенерация.   В   процессе   регенерации   акцептора используется пять молекул ФГА, в результате чего образуются три молекулы рибулезо­5­фос­фата.   Этот   процесс   идет   через   образование   4­,   5­,   6­,   7­ углеродных соединений. Прежде всего, первая молекула ФГА изомеризуется   катализируется   ферментом до   фосфодиоксиацетона.   Процесс триозофосфатизомеразой.   От   ФДФ   отщепляется   фосфат,   и   ФДФ превращается   во   фруктозо­6­фосфат   (ф­6­Ф).   Далее   от   Ф­6­Ф   (С6) отщепляется 2­углеродный фрагмент (—СО—СН2ОН), который переносится на   следующую   (третью)   триозу.   Это   транскетолазная   реакция   идет   при участии   фермента   транскетолазы.   В   результате   образуется   первая   пентоза   От   Ф­6­Ф   остается   4­углеродный   сахар (С5)­рибулезофосфат. эритрозофосфатфосфорилирование.  Для  этого  используются  три  молекулы АТФ, образовавшиеся в результате световых реакций. Все реакции, входящие в цикл Образовавшийся триозофосфат (ФГА) вступает в четвертую стадию темновых   реакций   ­   стадию   образования   продуктов   фотосинтеза.   (С4), который   конденсируется   с   четвертой   триозой   с   образованием   фосфата седогептулезодифосфата отщепления   (С7).   После   седогептулезодифосфат  превращается в седогептулезофосфат. Далее снова в   результате   которой   от происходит   транскетолазная   реакция, седогептулезофосфата   отщепляется   2­углеродный   фрагмент,   который переносится   на   пятую   триозу   Образуются   еще   две   молекулы рибулезофосфата.   Таким   образом,   в   результате   рассмотренных   реакций получаются 3 молекулы рибулезофосфата. При прохождении двух циклов из 12 молекул образовавшегося ФГА две молекулы выходят из них, образуя одну молекулу фруктозодифосфата (ФДФ). Из двух молекул фруктозодифосфата (Ф­1, 6­диФ) образуются фруктозо­6­фосфат (ф­6­Ф) и глюкозо­1­фосфат (Г­ 1­Ф). Глюкозо­1­фосфат, взаимодействуя с уридинтрифосфатом (УТФ), дает уридиндифосфоглюкозу (УДФГ). В свою очередь УДФГ, реагируя с Ф­6­Ф, дает   сахарозофосфат.   По­видимому,   именно   сахароза   является   первым свободным   сахаром,   образующимся   в   процессе   фотосинтеза.   Из   сахарозы образуются нефосфорилированныемоносахара (глюкоза и фруктоза). Крахмал образуется из аденозиндифосфоглюкозы (АДФГ) или уридиндифосфоглюкозы (УДФГ), процесс катализируется ферментом амилосинтетазой.  Среди первых продуктов фотосинтеза обнаружены аминокислоты. По­ видимому,   ФГК,   образовавшаяся   на   первом   этапе   цикла   Кальвина,   может превращаться   в   пировиноградную   кислоту.   Этот   процесс   идет   особенно интенсивно при недостатке НАДФН, из­за чего задерживается преобразование ФГК в ФГА (обычный путь в цикле Кальвина). Пировиноградная кислота в присутствии NH3 дает аминокислоту аланин. Образовавшиеся  органические  кислоты  в  процессе  аминирования  или переаминирования дают аминокислоты. Сам по себе синтез аминокислот еще не   означает   образование   белков.  Однако   было   показано,  что   между   этими двумя   процессами   имеется   прямая   связь.   Так,   под   влиянием   освещения синими   лучами   (458­480   нм)   усиливается   фотосинтетическое   образование, как аминокислот, так и белков. В присутствии  ингибиторов синтеза белка действие синего света не проявляется. Наконец, из промежуточных продуктов цикла   Кальвина   могут   образовываться   жиры,   липиды   и   другие   продукты. Состав  продуктов,  образующихся  при   фотосинтезе,  может   быть  определен   Под исходя   из   величин   фотосинтетического   коэффициента. фотосинтетическим   коэффициентом   понимается   отношение   выделенного   в процессе   фотосинтеза   кислорода   к   поглощенному   С02.   Если   в   процессе фотосинтеза образуются углеводы, то, согласно приведенному суммарному уравнению,   фотосинтетический   коэффициент   должен   быть   равен   единице: 602/6С02   =   1.   При   образовании   соединений,   более   восстановленных (содержащих   меньше   кислорода)   по   сравнению   с   углеводами, фотосинтетический   коэффициент   должен   быть   больше   единицы.   В   случае образования   белков   фотосинтетический   коэффициент   равен  1,25,   в   случае жира   ­  1,44.  Средняя   величина   фотосинтетического   коэффициента   для  27 видов растений оказалась равной 1,04. Расчеты показали, что такая величина фотосинтетического   коэффициента   указывает   на   образование   наряду   с углеводами некоторого количества белка (12%). Установлено, что величина фотосинтетического   коэффициента   меняется   в   зависимости   от   условий. Преобладание   синих   лучей   над   красными   приводит   к   увеличению   доли образующихся белков, тогда как красный свет благоприятствует образованию углеводов.   Усиление   снабжения   растений   азотом,   естественно,   также приводит   к   повышению   фотосинтетического   коэффициента   и   увеличению первичного   синтеза   белка.   Имеются   данные,   что   на   качество   продуктов фотосинтеза   оказывает   влияние   интенсивность   освещения.   При   высокой освещенности образуется больше углеводов, а при пониженной ­ аминокислот. Вывод:   Таким   образом,  изменяя   условия   среды,  можно   регулировать соотношение   продуктов   фотосинтеза.   Указанные   закономерности   имеют большое   не   только   теоретическое,   но   и   практическое   значение,   так   как состав позволяют регулировать химический     направленно     сельскохозяйственных растений и создавать условия для преимущественного синтеза   углеводов,   белков   или   жиров.   Выяснение   механизма   регуляции образования   тех   или   иных   продуктов   фотосинтеза   дает   возможность улучшить   состав   сельскохозяйственных   культур.   Примером   могут   служить опыты с одноклеточной водорослью хлореллой, у которой удалось повысить содержание аминокислот и жиров за счет снижения содержания углеводов путем добавления в питательную среду NH4Cl (10­3 М). Все же основным продуктом фотосинтеза являются сахара. В связи с этим можно следующим образом   расшифровать   суммарное   уравнение   фотосинтеза.   На   основании приведенных   реакций   можно   рассчитать   энергетический   баланс   цикла Кальвина.   Для   восстановления   шести   молекул   С02   до   уровня   углеводов требуется  18  молекул   АТФ  и  12  НАДФН.   Для   восстановления   до   уровня углеводов   одной   молекулы   С02   необходимы   три   молекулы   АТФ   и   две НАДФН.   Как   мы   видели,   для   образования   двух   молекул   НАДФН   и   двух молекул АТФ необходимо 8 квантов света. Недостающее количество АТФ   Для образуется   в   процессе   циклическогофотофосфорилирования. восстановления   одной   молекулы   С02   до   уровня   углеводов   должно   быть затрачено 8­9 квантов. Энергия квантов красного света равна 168 кДж/моль.  Таким   образом,   при   использовании   квантов   красного   света   на восстановление   одной   молекулы   С02   до   уровня   углеводов   затрачивается примерно 1340­ 1508 кДж. КПД фотосинтеза в этом случае должен составить около 30­35%. Однако в естественных условиях коэффициент использования света значительно меньше. В отличие от ферментов, принимающих участие в цепи   переноса   электронов   (световая   фаза   фотосинтеза),   ферменты   цикла   Согласованному Кальвина   локализованы   в   строме   хлоропластов. осуществлению   всех   реакций   способствует   то,   что   эти   ферменты   часто ассоциированы   на   поверхности   мембран   и   составляют   определенные ансамбли.   Путь   ассимиляции   углерода   при   фотосинтезе,   установленный Кальвином и предложенный в виде цикла Кальвина, является общим для всех автотрофных организмов.