Методические указания: Методы диагностики вирусных инфекций

Методические указания к практическому занятию

по ПМ 05. МДК.05.04 Теория и практика микробиологических исследований

для студентов специальности 32.02.01 Медико-профилактическое дело

Тема: Методы диагностики вирусных инфекций

Цель занятия: усвоить технику забора и подготовки клинического материала на  исследование  вирусных инфекций, познакомиться с методами диагностики вирусных инфекций.

После выполнения практической работы студенты должны уметь:

- проводить сбор, доставку, подготовку  к исследованию  клинического материала;

Студенты должны знать:

- методы диагностики вирусных инфекций.

Практическая работа способствует формированию следующих  компетенций:

ОК- 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес;

ОК-3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК-4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и личностного развития.

ОК-6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством.

 ПК 2.5. Соблюдать правила использования аппаратуры, оборудования и изделий медицинского назначения в ходе лечебно-диагностического процесса.

План занятия

I. Входной контроль

II. Инструктаж к практической работе. Демонстрация манипуляций по теме.

III. Самостоятельная работа студентов. Оформление дневников по практике

IV. Отчет о проделанной работе. Выходной контроль

Ход занятия.

I.          Ответьте на вопросы входного контроля:

1 Особенности культивирования вирусов.

2 Забор материала на вирусы.

4 Чем являются вирусы по химической природе?

5 Строение вирусов?

6  Какую форму имеют вирусы?

7 Царство вирусов.

II.Инструктаж к практической работе

Используя методические указания,    изучите методы диагностики вирусных инфекций

III.       Самостоятельная работа студентов:

1         Изучить  и записать способы взятия материала для анализа на вирусы

Способ взятия материала для анализа на вирусы определяется патогенезом вирусной инфекции.

Вирусы, вызывающие респираторные заболевания, легче всего выделить из содержимого носоглотки, трахеи или бронхов; мокрота для этих целей малопригодна из-за вязкости и загрязнения бактериями, что может вызвать гибель клеточной культуры.

Вирусы простого герпеса обычно выделяют из везикулярной жидкости.

Содержимое носоглотки и кал используют в тех случаях, когда лихорадка и сыпь позволяют заподозрить энтеровирусную инфекцию.

При геморрагическом цистите  вирусы выделяют из мочи.

Если вирус поражает внутренние органы,  для его выделения используют анализ биопсийного материала.

В Наибольшее диагностическое значение имеет выделение вирусов из крови и анализ биопсийного материала.

Забор материала. 

При заборе материала для исследований необходимо выполнять следующие условия:

• образцы следует отбирать как можно раньше либо с учетом ритма циркуляции возбудителя;
• материал следует отбирать в объеме, достаточном для всего комплекса исследований;
• образцы следует доставлять в лабораторию незамедлительно , при относительно кратковременной транспортировке (не более 5 сут) образцы сохраняют на льду, при более длительной - при температуре -50°С.

2         Изучить и записать методы диагностики вирусных инфекций

Для диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:

·         Вирусоcкопический

• Вирусологический.
• Серологический.
• Биологический.

Вирусоскопический метод – микроскопическое обнаружение вирусов в исследуемом материале. Вследствие малых размеров вирусы исследуют с помощью электронной микроскопии. Световую микроскопию вирусов  из-за малых размеров не применяют.

Биологический метод основан на использовании животных, чувствительных к соответствующему вирусу.

Серологические методы могут быть использованы для обнаружения в исследуемом материале,  как специфических антител, так и вирусных антигенов. Для этих целей могут быть использованы все серологические реакции (РСК, РНГА и др).

Вирусологический метод  заключается в выделении вирусов из исследуемого  материала путем заражения  лабораторных животных, куриных эмбрионов или культур клеток с последующей идентификацией.

Заражение куриных эмбрионов

Используют куриные  эмбрионы в возрасте 8-14 дней в зависимости от вида вируса и способа заражения. Заражение проводят на хорион-аллантоисную оболочку, в аллантоисную и амниотическую полость, в желточный мешок. Перед заражением определяют жизнеспособность эмбриона и отмечают карандашом на скорлупе границы воздушного мешка. Заражение куриных эмбрионов производят в боксе в строго асептических условиях, пользуясь инструментом, стерилизованным кипячением. Скорлупу над воздушным пространством протирают спиртом, об­жигают в пламени, смазывают 2% раствором йода, снова протирают спиртом и обжигают.

Заражение вирусом на хорион-аллантоисную мембрану. Обычно используют 10-12-суточные эмбрионы. Яйца просматривают в проходящем свете, отмечают локализацию воздушного мешка и выбирают область без сосудов. Осторожно удаляют фрагмент скорлупы, освобождают наружную оболочку и отслаивают её осторожным надавливанием. Затем делают отверстие у края воздушного мешка. При отсосе через это отверстие хорион-аллантоисная оболочка отслаивается от наружной оболочки. На неё наносят исследуемый материал.

 Заражение в амниотическую полость. Обычно используют 7-14-суточные эмбрионы, у которых после отслоения хорион-аллантоисной оболочки  расширяют отверстие, захватывают пинцетом амниотическую оболочку и выводят через хорион-аллантоисную оболочку. Через неё в амниотическую полость вводят исследуемый материал.

Заражение вирусом в аллантоисную полость. 10-суточные эмбрионы заражают через отверстия, сделанные в скорлупе и подлежащих оболочках .

Заражение вирусом в желточный мешок. Используют 3-8-суточные эмбрионы. Заражение проводят через отверстие, сделанное в воздушном мешке. 

Наблюдение и учет результатов заражении вирусом куриного эмбриона. В качестве вируссодержащего материала можно использовать содержимое желточного мешка, аллантоисную и амниотическую жидкости либо весь эмбрион, нарезанный вместе с окружающими тканями на кусочки.

Вскрытие эмбрионов производят через 48 — 72 часа инкубации в термоста­те. Наличие вируса в хролантоиской оболочке определяют:

1. По белесоватым непрозрачным пятнам разной формы;

2. В реакции гемаглютинации.

Рисунок 1 – Куриный эмбрион

IV. Выходной контроль. Тестовая работа

Методические рекомендации студентам к  практическому занятию

 по теме «Методы диагностики вирусных инфекций»

1 Забор материала на вирусы.

2 Культивирование вирусов.

3 Диагностика вирусных инфекций.

4 Как называется зрелая частица вирусов?

5  Как делятся вирусы по содержанию нуклеиновых кислот?

6 Сколько нуклеиновых кислот содержат вирусы?

Литература:

1.       Черкес Ф.К. Микробиология: стереотипное издание. Перепечатка с издания 1987г. – М.: Альянс, 2014. – 512  с.

2.        Основы микробиологии и иммунологии и иммунологии: учебник/под ред. В.В. Зверева,  М.Н. Бойченко. -  М.: ГЭОТАР – Медиа, 2014. – 368с.