федеральное государственное бюджетное профессиональное образовательное  учреждение «ПЕНЗЕНСКИЙ БАЗОВЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ                 Методические указания для студентов к практическому занятию по теме: «Методика окраски по по Цилю-Нильсену и Ожешко»   дисциплина ОП.02  Микробиология и техника микробиологических исследований   специальность 32.02.01 Медико-профилактическое дело 2а курс                                             г.Пенза

Методические указания для студентов

 к практическому занятию

по дисциплине ОП.02 Микробиология и техника микробиологических исследований

для студентов специальности 32.02.01Медико-профилактическое дело

Тема: «Методика окраски по по Цилю-Нильсену и Ожешко»

Цель занятия: познакомить студентов с методикой  окраски микробиологический  препаратов  по методам   Ожешко и Цилю-Нильсену.

После выполнения практической работы студенты должны уметь:

 - приготовить и окрасить по Ожешко микробиологический препарат;

- приготовить и окрасить по Цилю-Нильсену  микробиологический препарат;

- исследовать и описать готовый  препарат.

Студенты должны знать:

- меры безопасности при работе с инфицированным материалом;

- приготовление микроскопических препаратов;

- методы окраски по Ожешко и Цилю-Нильсену.

Практическая работа способствует формированию следующих компетенций:

ОК 13 Организовывать  рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

ОК 14 Вести утвержденную учетно – отчетную документацию.

План занятия

I.  Контроль исходного уровня знаний.

II. Инструктаж к практической работе. Демонстрация манипуляций по теме.

III. Самостоятельная работа студентов. Оформление дневников по практике

IV. Отчет о проделанной работе. Итоговый контроль.

Ход занятия

I.                  Контроль исходного уровня знаний (фронтальный опрос)

Ответьте на вопросы по теме: «Морфология микроорганизмов»:

1.Каким методом окраски изучают  кислотоустойчивые  бактерии?

2.Что выявляется  окраской по Ожешко?

3. В какой цвет окрашивается спора бактерий  по Ожешко?

4.В какой цвет окрашивается бактериальная клетка  по Ожешко?

5. В какой цвет окрашиваются  кислотоустойчивые бактерии?

II.               Инструктаж к практической работе

Используя методические указания,   изучите  методы окраски по Цилю-Нильсену и Ожешко.

III.           Самостоятельная работа студентов:

1.            Изучите  и запишите  в тетрадь  методы окраски по Цилю-Нильсену и Ожешко.

2.            Зарисуйте   возбудителя туберкулеза  (окраска по Цилю-Нильсену) и возбудителя столбняка (окраска по Ожешко)

4.Решите  предложенные задачи.

IV.            Итоговый контроль. Тестовый опрос.

Методические рекомендации студентам практическому занятию

по теме: Освоение методик изучения микробиологического мазка. Микроскопирование с иммерсией

1.     Назовите морфологические формы бактерий.

2.     Назовите  строение бактериальной клетки. Перечислите ее органеллы.

3.     Для чего клетки служит спора?

4.     Какие существуют способы окраски?

Литература:

1.     Черкес Ф.К. Микробиология: стереотипное издание. Перепечатка с издания 1987г. – М.: Альянс, 2014. – 512  с.

2.      Основы микробиологии и иммунологии и иммунологии: учебник/под ред. В.В. Зверева,  М.Н. Бойченко. -  М.: ГЭОТАР – Медиа, 2014. – 368с.

Методика окраски по по Цилю-Нильсену и Ожешко

Окраска по Цилю-Нильсену (для кислотоустойчивых бактерий)

Этот метод применяют  для выявления  бактерий  туберкулеза и проказы, имеющих в оболочке  клеток  большое количество  липидов, воска и оксикислот. Бактерии  кислото - , щелоче -  и спиртоустойчивы. Для увеличения проницаемости клеточной стенки первый этап окрашивания проводят  при подогревании.

1.            Фиксированный  препарат  покрывают  фильтровальной  бумагой и наносят  фуксин Циля. Удерживая  стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем  горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще 2 раза.  После охлаждения  снимают  бумагу и промывают препарат  водой.

2.            Препарат обесцвечивают  5%раствором  серной кислоты, погружая 2-3 раза в раствор или наливая кислоту на стекло, затем несколько раз  промывают водой.

3.            Окрашивают  водно-спиртовым раствором метиленового синего в течение 3-5 мин, промывают  водой и высушивают.

Микроскопируют с помощью иммерсионной  системы. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, остальные – в синий.

Окраска по Ожешко (выявление спор)

1.            На высушенный на воздухе мазок наливают  несколько капель 0,5% раствора хлороводородной  кислоты и подогревают до образования паров. Препарат высушивают  и фиксируют над пламенем.

2.            Окрашивают по способу Циля-Нильсена. Кислотоустойчивые споры окрашиваются в розово-красный, а бактериальная клетка – в голубой цвет.

Методы окраски по по Цилю-Нильсену и Ожешко

Окраска по Цилю-Нильсену

Окраска по Ожешко