Определение группы крови и резус фактора тест-реагентами «Цоликлон»

Государственное автономное образовательное учреждение

среднего профессионального образования Республики Крым 

«Евпаторийский медицинский колледж»

Методическая разработка

открытого практического занятия № 24

по теме:

«Определение группы крови и резус фактора тест-реагентами «Цоликлон»»

Тип занятия: практическое

ПМ.02 Проведение лабораторных гематологических исследований

МДК. 02.01. Теория и практика лабораторных гематологических исследований

Раздел 2.  Изучение дополнительных методов исследования крови.

Специальность 31.02.03 Лабораторная диагностика

Курс 3

Количество часов: 4

г. Евпатория, 2024

Автор: Зейналиева Э.Н., кандидат биологических наук, преподаватель высшей квалификационной категории

Рассмотрено и обсуждено

на заседании ЦМК

лабораторных дисциплин

от « 30 » «января» 2024 года

Протокол № 6

Председатель ЦМК       

                     Зейналиева Э.Н.

Государственное автономное образовательное учреждение среднего профессионального образования Республики Крым

 «Евпаторийский медицинский колледж»

План занятия (практического) № 24

Тема занятия 24: Определение группы крови и резус фактора тест-реагентами «Цоликлон»

МДК.02.01. Теория и практика лабораторных гематологических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Курс 3

Цели занятия:                 

Образовательные: Изучить иммунные свойства эритроцитов; Определить группы крови системы АВО и резус-фактора тест-реагентами «Цоликлон».

Развивающие: активизировать познавательную деятельность студентов, систематизировать и обобщать знания в области гематологии; подводить студентов к пониманию сущности изучаемого материала.

Воспитательные: приобщить студентов к профессиональной деятельности и к связанным с ней социальным функциям в соответствии с направлением подготовки и будущим уровнем квалификации, воспитать нравственно-деонтологические качества, чувство долга и ответственности.

Методическая цель: применение опережающих знаний при выполнении              внеаудиторной, самостоятельной работы студентами, а также рабочих листов, тестирования и ситуационных задач при мониторинге знаний, умений и навыков на разных этапах практического занятия.

Междисциплинарные связи:

Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ

Теория и практика лабораторных гистологических исследований

Теория и практика лабораторных общеклинических исследований

Теория и практика лабораторных биохимических исследований

Теория и практика лабораторных микробиологических исследований

Внутридисциплинарные связи:

Схема гемопоэза - эритропоэз

Исследование «клинического анализа крови»

Показатели красной крови.

Группа крови и резус-фактор

Место проведения: лаб. 405

Тип занятия: практическое

Количество часов: 4                                                                                                    Обеспечение занятия: методическая разработка, инструкция, оборудование лаборатории, раздаточный материал

Литература: «Методы клинических лабораторных исследований» //Под ред. проф. В.С. Камышникова и соавт.,/11 издание, Москва, «Медпресс-информ», 2022 г., 736с.

Интернет ресурсы: www.webmedinfo.ru;   http://www.medlab.scn.ru; http://rospotrebnadzor.ru

Студент должен знать:

задачи, структуру, оборудование, правила работы и техники безопасности в гематологической лаборатории; теорию кроветворения; морфологию клеток крови в норме;

понятия "эритроцитоз" и "эритропения", "лейкоцитоз" и "лейкопения", "тромбоцитоз" и "тромбоцитопения";

изменения показателей гемограммы при реактивных состояниях, при заболеваниях органов кроветворения (анемии, лейкозах, геморрагических диатезах и других заболеваниях);

морфологические особенности эритроцитов при различных анемиях; морфологические особенности лейкоцитов при различных патологиях. 

Студент должен уметь:

производить забор капиллярной крови для лабораторного исследования;

готовить рабочее место для проведения общего анализа крови и дополнительных исследований;

проводить общий анализ крови и дополнительные исследования;

дезинфицировать отработанный биоматериал и лабораторную посуду;

работать на гематологических анализаторах;

Студент должен обладать:

общими компетенциями:

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и личностного развития.

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в  профессиональной деятельности.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эф­фективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

Профессиональные компетенции

ПК     2.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных гематологических исследований.

ПК     2.2. Проводить забор капиллярной крови.

ПК     2.3. Проводить общий анализ крови и дополнительные гематологические исследования; участвовать в контроле качества.

ПК     2.4. Регистрировать результаты гематологических исследований.

ПК    2.5. Проводить утилизацию капиллярной и венозной крови, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты

Структура занятия:

1.                 Организационный момент                                                                   3 мин.

2.                 Мотивация (цели) занятия                                                                   2 мин.

3.                 Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний)   20 мин.

4.                 Практическая часть                                                                          120 мин.

5.                 Итоговый контроль                                                                             30 мин

6.                 Задание на дом                                                                                      2 мин.

7.                 Подведение итогов занятия, оценка работы студентов                        3 мин.

Ход занятия

1. Организационный момент. Приветствие, вступительное слово преподавателя. Проверка присутствующих, внешнего вида студентов, готовности студентов к практическому занятию.

2.   Цели (мотивация) занятия.  Изучение методов определения группы крови системы АВО и резус-фактора «эритротестом» и тест-реагентами «Цоликлон», для понимания иммунных свойств эритроцитов, является необходимым элементом освоения программы профессионального модуля ПМ.02.

3.   Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний):

а) проверка знаний: вопросы для мониторинга исходного уровня 

знаний (Приложения 1)

б) проверка работы по изученному материалу – заполнить таблицы

 (Приложения 2)

в) подведение итогов контроля: оценка исходных знаний в рабочих листах.

4. Практическая часть:

а) подготовка студентов к самостоятельной работе (проведение инструктажа по выполнению заданий). Демонстрация практических умений и навыков преподавателем; разбор алгоритмов действия практических навыков, рекомендации по выполнению (алгоритм выполнения практического задания приготовления препаратов в приложениях).

б) самостоятельная работа студентов: Задания студентам для выполнения практической работы  

·     Выполнить определение группы крови и резус-фактора эритротестом и тест-реагентами «Цоликлон».

·      Оформить данные в рабочих листах и тетрадях.

в) подведение итогов самостоятельной работы.

·        Выводы о проделанной работе. 

Итоговый контроль.  (Приложение 3).

·        Тестовый контроль

·        Ответы на вопросы

·        Решение ситуационных задач

·        Проверка преподавателем рабочих листов и тетрадей студентов

5.Задание на дом. подготовиться к итоговому занятию по Разделу 2 «ДМИ»:  повторить лекции 16-22, практические занятия № 16-24, выполнить задания к практическому заданию № 25 в рабочих тетрадях.

    6.Подведение итогов занятия, оценка работы студентов. Преподаватель оценивает работу студентов, разъясняет ошибки; отвечает на вопросы студентов.

Преподаватель высшей квалификационной категории,

 кандидат биологических наук                                        Э. Н. Зейналиева

По состоянию на 2021 год, по данным Международного общества переливания крови, у человека обнаружено 43 системы групп крови. Из них наибольшее значение в прикладной медицине имеет система АВ0 и резус-фактор. Остальными системами нельзя пренебрегать, в некоторых случаях может привести к тяжелым последствиям и даже смертельному исходу реципиента. Одной из самых редких групп крови в мире известна как «резус-нулевая». Менее чем у 50 человек в мире была обнаружена эта группа, за что получила название «золотая кровь», сообщает Кливлендская клиника. Эритроциты «золотой крови» не имеют никаких агглютиногенов, поэтому эта кровь совместима с любой группой крови и резусом. Люди, имеющие различные группы крови, в неодинаковой мере подвержены тем или иным заболеваниям. Так, у людей с I (0) группой крови чаше встречается язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. Эти факты объясняются тем, что агглютиногены А и В, предохраняют стенку от повреждения протеолитическими ферментами. Люди, имеющие II (А) группу крови, чаще страдают и тяжелее переносят сахарный диабет, у них повышена свертываемость крови, из-за чего возникают инфаркты миокарда и инсульты. Согласно статистическим данным, у лиц с II (А) группой крови чаще встречаются раковые заболевания желудка и половых органов, а у лиц III (В) группы — рак толстой кишки. Вместе с тем лица, имеющие I и IV группы крови, менее восприимчивы к возбудителям чумы, но у них тяжелее протекает натуральная оспа. У резус-отрицательных людей различные заболевания крови встречаются приблизительно в 6 раз чаще, чем у резус-положительных.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

 Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

1. первичное определение группы крови и резус фактора (цоликлоны Анти-А, Анти-B и Анти-D);

2. вторичная диагностика группы крови и резус-фактора (стандартные сыворотки и перекрестный способ,определение фенотипа, т.е.антигенов C,c, E, e,K, k)

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не  учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Тяжелейшие осложнения, возникающие при переливании несовместимой крови и резус-конфликте, обусловлены не только образованием конгломератов эритроцитов и их гемолизом, но и интенсивным внутрисосудистым свертыванием крови, так как в эритроцитах содержится набор факторов, вызывающих агрегацию тромбоцитов и образование фибриновых сгустков. При этом страдают все органы, но особенно сильно повреждаются почки, так как сгустки забивают «чудесную сеть» клубочка почки, препятствуя образованию мочи, что может быть несовместимо с жизнью

                                                                        Приложение 1

ВОПРОСЫ ДЛЯ ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:

1.   Кто открыл группы крови? Нобелевский лауреат Карл Ландштейнер в 1901 г

2.   Когда и у кого был обнаружен резус? В 1937 году К. Ландштейнер и А. Винер обнаружили в эритроцитах обезьяны макаки резус АГ, названный ими резус-фактором. В дальнейшем оказалось, что приблизительно у 85% людей белой расы также имеется этот АГ. Таких людей называют резус-положительными (Rh+). Около 15% людей этот АГ не имеют и носят название резус-отрицательных (Rh).

3.Кто и когда открыл 4 группу крови и ввел обозначения ? Чешский ученый Ян Янский в 1940 году открыл 4 группу крови системы АВ0 и ввел термины: аглютиногены и агглютинины.

4.Какие факторы определяет группу крови и резус-фактор?

Наличие аглютиногенов  А, В, АВ, D и аглютининов – альфа, бетта, d.

5.Перечислите все свойства антител? Специфичность, температурный оптимум, Рh-оптимум, титр антител, характер появления, характер действия, иммунные.

6. Что содержится в стандартных сыворотках I, II, III групп крови?

аглютинины альфа и бетта в 1 группе, бетта-во 2-1 и альфа – в 3-й группе.

7.Что содержится в стандартных эритроцитах для определения группы крови по системе АВ0?На эритроцитах содержатся рецепторы аглютиногенов 0, А, В и АВ

8.Что является действующим началом цоликлона? Это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека

9.Как получают моноклональные антитела для цоликлонов?Моноклональные антитела получают при помощи гибридов путем, или определенных штаммов бактерий, полученных методами генной инженерии. Также используют мышиные моноклональные 

10.Какая группа крови у человека, если при определении реакция агглютинации произошла в стандартных сыворотках I и II групп крови?

III группа, т. к аглютинировали В с бетта.

11. Если агглютинация произошла со всеми тремя стандартными сыворотками и исследуемой кровью, то результат IV группа. Ваши действия? Провести реакцию со стандартной сывороткой IV группы.

12. Где находятся агглютинины? В плазме и сыворотке крови.

13. Что такое агглютиногены? Это естественный антиген, содержащийся в эритроцитах, определяющий их групповую принадлежность, представляющие собой рецепторы на поверхности эритроцитов, взаимодействующие с соответствующими аглютининами, не зависящие от пола и возраста.

14. Методы определения группы крови? Перекрестный метод (прямой и непрямой реакции), тест-реагентами Цоликлон.

15. Методы определения резус-фактора? Определение резус-фактора желатиновым методом и тест-реагентами Цоликлон.

16. Как наследуются группы крови и резус-фактор? По аутосомно-доминантному признаку

 Приложение №2

Задание 2. ЗАПОЛНИТЬ ТАБЛИЦЫ 1-4:

                         Таблица 1.                         Таблица 2. Зарисовать результаты

Таблица 3.  Зарисовать результаты при взаимодействии исследуемой сыворотки пациента со стандартными эритроцитами

Таблица 4. Для какой группы характерны данные описания

Задание 3. Зарисовать портреты групп крови c указанием вариантов Rh.

Основной этап занятия: Задание 4. Определить группу крови и резус цоликлонами; Задание 5 -эритротест-группокарт; Задание 6 – заполнить таблицы по учету результатов.

                                                                                                   Приложение 3

Алгоритм определения группы кровии резус-фактора

 тест-реагентами «Цоликлон»

Задание 4. Отработайте технику выполнения метода определения группы крови системы АВО по чек-листу на оценку.

Оценочный лист. Навык: Определение группы крови системы АВ0 и резус-фактора

Задание 5. Провести определение  групп крови и резус-фактора Эритротестом – «Группокарт», согласно инструкции, результаты внесите в таблицу 6.

Задание 6. Заполните таблицы 5 и 6. Знаком (+) обозначьте наличие агглютинации, знаком (–) ее отсутствие в соответствующих группах крови. Опишите ход работы цоликлонами в виде схемы. Сделайте вывод, к какой группе системы АВ0 относится исследуемая вами кровь.

            Таблица 5. Учет результата                           Таблица 6. Учет результата

Заключительный этап занятия: Задание 7. тестовый контроль;

Задание 8. ответить на вопросы; Задание 9. Решить ситуационные задачи  Задание 10. Вывод о проделанной работе.

Приложение 4

Тесты с одним вариантом выбора.

Ответы:

Приложение 5

Задание 8. Ответить на вопросы:

1. Сколько известно систем крови по групповой принадлежности и резусу?

Известно 200 и 43 системы крови на 2021 год уже верифицированны.

2.Перечислите правила переливания крови. - Определить группу крови и резус, провести реакцию на совместимость реципиента и донора. Вводят вначале 10 мл крови и наблюдают 10-15 мин, если нет последствий, то вводят не более 150 мл донорской крови.

3.Чем опасно переливание несовместимой крови? Анафилактический шок, летальный исход.

4. Каковы первые признаки переливания несовместимой крови?

5. Что такое резус? Резус-фактор — это сложная система, включающая более 40 антигенов, обозначаемых цифрами, буквами и символами. Чаще всего встречаются резус-антигены типа D (85%), С (70%), Е (30%), е (80%) — они же и обладают наиболее выраженной антигенностью. Система резус не имеет в норме одноименных агглютининов, но они могут появиться, если резус-отрицательному человеку перелить резус-положительную кровь.

6. В чем суть иммунных свойств антител? Различают полные (альфа и бетта) и неполные (d)-антитела резус, плацента-проницаемые. Поэтому конфликт наблюдается только по Rh и не встречается по группам крови? 

7. Когда возникает резус-конфликт? У Rh-отрицательной матери резус-положительным плодом.

Задание 9. Решить ситуационные задачи:                                                                                                                

Задача 1. Человеку необходимо срочно перелить кровь и нет возможности определить ее резус-принадлежность. Какую кровь по системе резус безопасней перелить? Обоснуйте ответ.

Задача 2. Больному с резус-отрицательной кровью произведено первичное переливание резус-положительной крови донора. Через два года произведено повторное переливание резус-положительной крови. Какая разница в реакции крови при первичном и повторном переливании?

Задача 3. Реакция агглютинации произошла с цоликлонами анти-А, анти-В и анти-D. Определите группу крови и резус. Объясните причину агглютинации.

Задача 4. Женщина с резус-отрицательной кровью беременна резус-положительным плодом. Беременность первая. Ребенок родился здоровым. Через несколько месяцев после родов по жизненным показаниям женщине была перелита одногруппная кровь, однако больная погибла при явления гемотрансфузионного шока. Что могло явиться причиной смерти?

Задача 5. Муж и жена имеют соответственно кровь 0 (I) и АВ (IV) группы. В деле по установлению отцовства ребенка оба утверждают, что данный ребенок не может быть их сыном, так как у него А(II) группа крови, а вот девочку имеющую кровь АВ(IV) группы, они готовы признать своей. Ваше мнение.

Задача 6. В семье трое детей, и все имеют кровь разной группы: А (II), В (III), АВ (IV). Могут ли они быть родными братьями и сестрами или нет?

Задача 7. У новорожденного гемолитическая желтуха в результате резус-конфликта. Кровь какой группы Вы перельете ребенку, если у него группа крови В (III) Rh⁺?                                

Задача 8.Женщина с III группой крови возбудила дело о взыскании алиментов с мужчины, имеющего I группу, утверждая, что он отец ребенка. У ребенка I группа. Какое решение должен вынести суд?

Ответы к ситуационным задачам:

1.     Безопаснее Rh- кровь;

2.     При повторном переливании уровень титра резус-антител будет возрастать с большей скоростью.

3.     IV (АВ) Rh+.

4.     Причина смерти анафилактический шок, из-за переливания Rh+ крови.

5.     На самом деле ребенком этих родителей является мальчик А(II) группы, тогда как

ребенок АВ(IV) группы, не может быть их ребенком.

6.     Могут быть родственниками, если родители имеют А (II) и В (III),гетерозиготные по генотипу.

7.     Безопаснее перелить В (III) Rh-, т.к гуморальный механизм образования антител у новорожденных еще не совершенен.

8.     Ребенок может быть общим при гетерогенном генотипе у женщины по группе крови, но если у женщины гомозиготный генотип, то у их ребенка 1 группа быть не может.

Задание 10. Вывод о проделанной работе

ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 24

Тема занятия.  Определение группы крови и резус-фактора тест-реагентом «цоликлон»

МДК 02.01. Теория и практика лабораторных гематологических исследований

Специальность: 31.02.03. Лабораторная диагностика

Курс: 3           

Оборудование: стол лаборанта, наборы «Цоликлон», эритротест-группокарт, рабочие листы и тетради.

І. Цели занятия:

Учебные:

•         Изучить метод определения группы крови и резус тест-реагентами «цоликлон»

•         Рассмотреть диагностическую роль определения группы крови и резус

Студент должен уметь:

•      Готовить рабочие столы для определения группы крови и резус

•      Выполнять методы определения группы крови и  резус цоликлонами

•      Оценивать полученные результаты анализа по групповой принадлежности системы АВ0 и резус-фактору.

Студент должен знать: эритропоэз, иммунные свойства эритроцитов, методы иммунологической оценки эритроцитов.

ІІ. Структура и план занятия:

ІІІ. Литература: Под ред. проф.В.С. Камышникова «Методы клинических лабораторных исследований» 11 издание, Москва, «Медпресс-информ», 2022, 736с.

Интернет ресурсы: www.webmedinfo.ru медицинский образовательный портал.

ІV. Домашнее задание  Повторить темы лекций № 16-22. Практические занятия № 16-24.

Скачано с www.znanio.ru