СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЭРИТРОЦИТОВ

СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЭРИТРОЦИТОВ В 1 МКЛ КРОВИ

Метод подсчета в счетной камере

Принцип метода. В строго определенном объеме камеры подсчитывают под микроскопом клеточные элементы, а затем производя! пересчет полученного результата на 1 мкл крови. Кровь предварительно разводят с целью уменьшения числа клеток, подлежащих счету. Самым удобным и достаточно точным является способ разведения крови в пробирках. Применяемый широко ранее забор крови в смесители-меланжеры в настоящее время употребляется мало. Пробирочный метод, предложенный Н. М. Николаевым, заключается в следующем. В предварительно высушенную чистую коническую пробирку точно отмеривают пипеткой 4 мл разводящей жидкости и осторожно выдувают в нее 0,02 мл капиллярной крови (кровь забирают пипеткой от гемометра Сали). Полученное разведение 1:202 можно практически принять равным 1:200. Взвесь тщательно перемешивают и затем заполняют камеру.

В Советском Союзе обычно пользуются камерой с двумя сетками Горяева разграниченными глубокой поперечной канавкой. Сбоку от сеток находятся стеклянные прямоугольные пластинки, к которым притираются специальные шлифованные покровные стекла.

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15 15). Большие квадраты, расчерченные вертикально и горизонтально на 16 ма лых квадратов, чередуются с квадратами, разделенными только вертикальными или горизонтальными линиями, и с квадратами чистыми, без линий. Глубина камеры равна '/ю мм, сторона малого квадрата — 'До мм; таким образом, объем малого квадрата равен 4000 ММ³.

Это важно помнить для правильного расчета числа эритроцитов или других клеточных элементов в 1 мкл крови.

Перед заполнением камеру и шлифованное покровное стекло моют и высушивают. Покровное стекло притирают к камере так, чтобы появились радужные, ньютоновые кольца (только при этих условиях соблюдается правильный объем камеры). Каплю разведенной крови вносят пипеткой под притертое покровное стекло камеры. После заполнения камеру оставляют на 1 —2 мин в покое для оседания форменных элементов, затем приступают к подсчету при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения (прикрытой диафрагме и несколько опущенном конденсоре).

Эритроциты считают в 5 больших квадратах (5'16 = 80 малым квадратам), расположенных по диагонали, поскольку распределение клеток в камере может быть неравномерным. Для этого под микроскопом отыскивают левый верхний большой квадрат (разграфленный), подсчитывают количество находящихся в нем эритроцитов, затем по диагонали вниз и направо находят следующий разграфленный квадрат и т.

д. Чтобы не сосчитать дважды одни и те же клетки, пользуются следующим правилом (рис. 5): счету подлежат все клетки внутри малого квадрата и лежащие на пограничных линиях, если они большей своей половиной заходят внутрь данного квадрата. К ним, кроме того, присчитывают эритроциты, пересекаемые пограничными линиями пополам, но только те из них, которые находятся на верхней и левой линиях, так как клетки, лежащие на двух других линиях, будут сосчитаны в следующих квадратах. Эритроциты, расположенные большей своей частью вне данного квадрата, не считают.