Каталитическая активность амилазы

Лабораторная работа

«Каталитическая активность амилазы»

Цель работы: изучить действие фермента амилазы слюны, её специфичность и изменение активности под воздействием различных факторов.

Оборудование и материалы: крахмальный клейстер, раствор I₂ в KI  (или I₂ в спирте); 0,4%-ный раствор соляной кислоты HCl; 15%-ный раствор гидроксида натрия NaOH; 1%-ный раствор поваренной соли NaCl; 0,5%-ный раствор сульфата меди(II) СuSO₄, фильтровальная бумага, стакан с кипячёной водой, пустой стакан, стеклянные палочки и пластина, стакан с горячей водой, воронка, марля, спиртовка.

Информация для работы

Работа направлена на изучение скорости ферментативных реакций и их зависимости от воздействия различных факторов. Амилаза слюны является специфическим ферментом, расщепляющим крахмал до солодового сахара – мальтозы. Этот фермент не действует на целлюлозу, так как характер связей в ней отличается от связей в крахмале. Соляная кислота инактивирует фермент и полностью прекращает реакцию. Щелочь ускоряет реакцию значительно.

Поваренная соль также ускоряет реакцию [3].            

Ход работы

1.                 Для приготовления фермента пополощите рот в течение 2 минут кипячёной водой. Повторите процедуру 2-3 раза. Соберите жидкость в один стакан и отфильтруйте через два слоя марли.

2.                 В пять пробирок налейте по 5 мл крахмального клейстера. Во вторую пробирку добавьте 1 мл раствора соляной кислоты, в третью пробирку 1 мл раствора поваренной соли, в четвёртую – 1 мл раствора щёлочи. Во все пробирки, кроме пятой, добавьте по 5 мл раствора слюны. В пятую пробирку добавьте слюну, предварительно прокипячённую. В шестую пробирку поместите несколько кусочков фильтровальной бумаги и также добавьте слюны. Все пробирки поставьте в стакан с нагретой до 40 °С водой.

3.                 В каждую пробирку вставьте по стеклянной палочке. После этого на стеклянную пластину нанесите в один ряд по одной капле раствора йода.

Сделайте пять таких рядов на стеклянной пластине.

4.                 Через 2 мин возьмите пробы из каждой пробирки, кроме шестой. Для этого стеклянной палочкой из каждой пробирки нанесите по капле исследуемого раствора в каждую каплю йода на стеклянной пластине. Каждый ряд капель йода соответствует одной пробирке. Повторяйте процедуру каждые 2 минуты. Проследите, как изменяется окраска йода. Реакция считается законченной, если окраска йода с раствором в очередной пробе не изменяется.

Результаты проб занесите в таблицу, отмечая знаком «+» наличие реакции с йодом и знаком «–» её отсутствие.

Свойства фермента амилазы

5.                 Сделайте вывод о том, какое из добавленных веществ ускоряет расщепление крахмала, какое замедляет или совсем прекращает реакцию.

Почему в пробирке с прокипячённой слюной реакция не идёт вообще?

6.                 При гидролизе крахмала образуется мальтоза. Для доказательства её образования проделайте качественную реакцию. В первую контрольную пробирку после окончания реакции прилейте 2 мл раствора гидроксида натрия NaOH. Осторожно по каплям добавьте раствор сульфата меди (II) CuSO₄. Медленно нагрейте жидкость до кипения. Появляется жёлтый осадок.

7.                 Проверьте, произошли ли изменения с фильтровальной бумагой в шестой пробирке. Для этого проделайте качественную реакцию на мальтозу, как указано в пункте 6. Изменилась ли окраска исследуемого раствора? Занесите данные в таблицу. Сделайте вывод о специфичности действия фермента амилазы. Какое значение имеет специфичность действия амилазы?