План практического занятия "Физиология микроорганизмов. Методы изучения"

Тема: Физиология микроорганизмов. Методы изучения.

Цель:

Освоить простейшие приемы культивирования бактерий

 

Литература для подготовки:

 

Основной источник	Ссылка	QR
Основы микробиологии и иммунологии. учебник / Под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2019.
Гл.3, 3.4. удаление лабораторных отходов	http://www.medcollegelib.ru/doc/ISBN9785970435991-0004/003.html?SSr=350133ed661727e3d83150889501497664
Гл 4. Физиология микроорганизмов	http://www.medcollegelib.ru/doc/ISBN9785970454824-0005.html?SSr=48013462ed11035c3ce150889501497664
Дополнительные источники
Лекция 4	https://vk.com/doc171747733_489073148
Материалы практики	https://vk.com/doc171747733_494319612
Питательные среды	https://vk.com/club203934598?z=video-203934598_456239034%2F59ce8975224f4142fb%2Fpl_wall_-203934598
Техника бактериального посева	https://vk.com/club203934598?z=video-203934598_456239032%2Fb7ce35570178400a48%2Fpl_wall_-203934598
Колонии бактерий	https://probakterii.ru/prokaryotes/raznoe/kolonii-bakterij.html

 

 

 

Ход занятия

1.     Вводная часть.

1.1 . Организационный момент.

Проверьте свою готовность к занятию:

В тетради записана тема и цель занятия, подготовлен проект отчета проделанной работы.

1.2 . Мотивация занятия.

Микробиологическая работа, и в первую очередь практические задания, связана с приготовлением питательных сред для выращивания микроорганизмов. Среды необходимы для накопления, выделения и хранения микроорганизмов.

На занятии вы научитесь готовить питательные среды, делать посевы, культивировать микроорганизмы.

 

1.3. Контроль исходного уровня знаний.

Ответьте на вопросы и задания:

1.     Какова основная цель метаболизма микроорганизмов?

2.      На какие группы по отношению к кислороду подразделяются бактерии?

3.     Как растут бактерии на плотной питательной среде?

4.     Колония это …..…..(закончите предложение).

5.     Культуральные свойства бактерий определяются…..(закончите предложение).

6.     Гетеротрофы это…..(закончите предложение).

7.     Для чего применяют питательные среды?

8.     Чистая культура это…..(закончите предложение).

9.     В чем особенности культивирования риккетсий и хламидий?

10. Что такое агар?

11. Приведите пример простой питательной среды.

12. Для чего используют элективные питательные среды?

13. Для чего используют среды обогащения?

14. Какие бывают среды по консистенции?

2.     Основная часть.

2.1.          Изучение теоретического материала. Приложение 1.

Приложение 1.

Культивирование микроорганизмов – это один из основных приемов в микробиологии. Культивирование – искусственное выращивание микроорганизмов. Используется для изучения свойств микроорганизмов и для диагностики инфекционных заболеваний.

Из-за малых размеров микроорганизмов работа в лаборатории проводится не с одной особью, а с популяцией организмов, или культурой. Культура микроорганизмов, состоящая из клеток одного вида, носит название чистой культуры. Если число видов два или больше, то говорят о смешанной культуре.

Для культивирования микроорганизмов (выращивание в искусственных условиях in vitro) необходимы особые субстраты - питательные среды. На средах микроорганизмы осуществляют все жизненные процессы (питаются, дышат, размножаются и т. д.), поэтому их еще называют средами для культивирования. Также для успешного культивирования микроорганизмам необходима оптимальная температура  +37°С, влажность, доступ  воздуха.

Питательные среды являются основой микробиологической работы, и их качество нередко определяет результаты всего исследования. Среды должны создавать оптимальные (наилучшие) условия для жизнедеятельности микробов.

Требования к питательным средам

1. Питательность – наличие всех питательных веществ;

2. Реакция рН – 7,2 (слабощелочная);

3. Оптимальная влажность.

4. Определенная вязкость.

5. Изотоничность – соответствие 0,5%   раствору натрия хлорида.

6. Стерильность, чтобы другие микробы не препятствовали росту изучаемой микрофлоры.

7. Прозрачность.

Классификация питательных сред

1. По степени  сложности(составу):

-        Простые (мясопептонный бульон (МПБ) и мясо­пептонный агар (МПА));

-        Сложные (готовят на основе МПБ и МПА, добавляя компонент, благоприятный для определенного вида –среда Эндо-добавлен фуксин, благоприятный для энтеробактерий и т.д.).

2. По происхождению:

-        Натуральные (МПБ – мясо-пептонный бульон, пептонная вода и др.);

-        Синтетические.

3. По консистенции:

-        Жидкие;

-        Полужидкие;

-        Плотные. Для их получения в среду добавляют агар-агар, полученный из морских водорослей, при застывании которого среда становится плотной.

4. По целевому назначению:

-        Основные: (мясо-пептонный бульон, питательный агар и др.) применяются для выращивания большинства микроорганизмов.

-        Элективные:   для выращивания  определенного вида микроба.

-        Дифференциально-диагностические: для отличия одних микроорганизмов от других (среды Гисса с добавлением углеводов).

-        Консервирующие: предназначены для первичного посева при длительной транспортировке исследуемого материала.

 

2.2.  подготовьте ответы на контрольные вопросы к Приложению 1.

1.     Какова цель культивирования?

2.     Смешанная культура это….(закончите предложение).

3.     Чистая культура это….(закончите предложение).

4.     Условия культивирования микроорганизмов ……(перечислите).

5.     Значение питательных сред.

6.     Требования к питательным средам.

7.     Как классифицируют питательные среды по составу?

8.     Как классифицируют питательные среды по происхождению?

9.     Как классифицируют питательные среды по консистенции?

10. Как классифицируют питательные среды по целевому назначению?

 

 

2.3. Изучение теоретического материала. Приложение 2,3.

 

Приложение 2.

Этапы приготовления питательных сред

1. Подготовка посуды.

Посуду вымыть, просушить. Посуду для питательных сред запрещается использовать в других целях, т.к. примеси посторонних веществ могут препятствовать росту микроорганизмов.

2. Варка среды.

3. Установление рН – проводят с помощью индикаторных бумажек.

4. Осветление – проводят, если среда помутнела при помощи белка куриного яйца.

5. Фильтрация через ватно-марлевый фильтр.

6.Разлив в посуду.

7.Стерилизация  - проводится в автоклавах при температуре 80 -120 С.

8.Контроль готовых сред:

1)  На стерильность – чашки со средой ставят в термостат на 2 суток, если на чашках не будет признаков роста микроорганизмов, то среды считаются стерильными.

2)  Химический – определение рН среды, содержание азота, пептона, хлоридов и др.

3)  Биологический – на питательность. Среды засевают микроорганизмами и по их росту судят о питательных свойствах среды.

 

Приложение 3

 

Методы посевов микроорганизмов на питательные среды.

 

Посев — один из стационарных методов культивирования микроорганизмов на питательных средах.

 В зависимости от содержания исследуемых бактерий в образце, проводят посев на плотные питательные среды (для получения изолированных колоний и определения чистоты культуры).

Если в исследуемом материале содержание микроорганизмов незначительное, то посев проводят на жидкие среды обогащения.

Во время посева материала необходимо исключить попадание других микроорганизмов,  поэтому нельзя разговаривать во время посева,  работу производить быстро и соблюдать технику личной безопасности.

Инструменты для посева микроорганизмов

1.     Микробиологический шпатель.

2.      Пастеровская пипетка.

3.     Бактериальная петля.

 

Различают различные методы посева.

1.     Метод истощающего штриха. Применяют для получения отдельных колоний.

2.     Метод посева сплошным газоном. Применяют при определении общего микробного числа или при определении чувствительности бактерий к антибиотикам.

Метод посева истощающим штрихом.

В основе метода лежит механическое разобщение микробных клеток путем снижения их концентрации по ходу нанесения исследуемого материала бактериологической петлей штриховыми  движениями по поверхности плотной питательной среды (а) и последующим их культивированием с целью получения изолированных колоний.

Метод Дригальского.

Посевы «газоном» производят на плотную питательную среду в чашке Петри. Для этого петлёй,  пипеткой или шпателем  наносят посевной материал на всю поверхность питательного агара по методу Дригальского. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий с разделением их на колонии.

         Для взятия санитарного смыва мы используем метод посева истощающим штрихом для получения отдельных колоний.

 

Приложение 4

 

Взятие  и посев смыва  с объектов внешней среды.

 

Смывы берутся стерильными ватными тампонами,  помещенными в пробирки с физиологическим раствором хлорида натрия.

Смывы проводятся для оценки санитарно-гигиенического состояния предприятий общепита, лечебно - профилактических учреждений, детских учреждений.

Взятие смыва проводится с объектов внешней среды с поверхности площадью 10´10 см. Каждый  смыв берется только с одного объекта исследования.

Используют ватные тампоны (палочка с намотанной на нее ватой вставлена в пробирку) или салфетки 5×5 см, которые захватывают стерильным пинцетом. Тампоны и салфетки увлажняют, помещая их в пробирки с 2 мл изотонического раствора натрия хлорида.

1.     Тампон перед взятием смыва смочить  в физиологическом растворе  в пробирке.

2.     Вынуть из пробирки.          

3.     Провести взятие смыва тампоном с исследуемой поверхности.

4.     Опустить тампон в пробирку и   в течение часа доставить в лабораторию.

 

2.4.          Самостоятельная работа по отработке навыков приготовления питательных сред и взятия и посева санитарных смывов.

1.     Налейте в пробирку 2 мл физ. раствора.

2.     Приготовьте ватные тампоны на металлических палочках.

3.     Опустите в пробирку, смочите ватный тампон.

4.     Возьмите санитарный смыв с дистальных отделов пальцев рук.

5.     Опустите в пробирку ватный тампон, не касаясь воды.

6.     Осуществите посев методом истощающего штриха на твердую питательную среду в чашку Петри.

7.     Переверните чашку Петри дном вверх, для предотвращения попадания конденсата на растущие колонии.

8.     Подпишите свой посев.

9.     Поставьте в термостат при t 37⁰С.

 

3.     Заключительная часть.

3.1. Составление   отчета по выполненной работе.

Оформите результаты работы.

 

3.2. Ответы на итоговые вопросы.

 

1.     Что позволяет установить метод посева?

2.     Перечислите основные требования, которые предъявляют к питательным средам.

3.     Что входит в понятие «культуральные свойства бактерий»?

4.     Каким должен быть рН сред для культивирования большинства патогенных бактерий?

5.     Какое вещество служит для уплотнения питательных сред?

6.     Дайте определение понятию «чистая культура».

7.     Что такое бактериологическое исследование?

8.     Приведите примеры простых питательных сред.

9.     Приведите примеры сложных питательных сред.

10. Какие виды посева существуют?

11. Какой  вид посева применяют при определении чувствительности бактерий к антибиотикам?

12. Какой вид посева применяют для разобщения микробных клеток?

13. Какие условия необходимы для культивирования микроорганизмов?

14. Назовите первый этап приготовления питательных сред.

 

3.4. Подведение итогов.

Обсудите проблемные вопросы..

Выслушайте итоговую оценку.

 

3.5. Домашнее задание.

Подготовиться к теме «Микробиологические основы химиотерапии.»

 

Скачано с www.znanio.ru