План практического занятия по микробиологии по теме "Микробиологические основы химиотерапии"для специальности лечебное дело

Тема: Микробиологические основы химиотерапии.

 

Цели: освоить простейшую пробу на чувствительность к ХТП бактерий

 

 

Литература/ видеофайлы для подготовки:

 

Основной источник	Ссылка	QR
Основы микробиологии и иммунологии. учебник / Под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2019.
Гл.6  Антибактериальные препараты	http://www.medcollegelib.ru/doc/ISBN9785970435991-0007.html?SSr=560133ed5601410abc1450889501497664
Гл.3, 3.4. удаление лабораторных отходов	http://www.medcollegelib.ru/doc/ISBN9785970435991-0004/003.html?SSr=350133ed661727e3d83150889501497664
Гл.9, 9.2.  сбор, хранение и транспортировка материала для исследования	http://www.medcollegelib.ru/doc/ISBN9785970435991-0010/005.html?SSr=350133ed661727e3d83150889501497664
Дополнительные источники
Реестр лекарственных средств России	https://www.rlsnet.ru/fg_index_id_244.htm
Лекция 10
Презентация «Общая характеристика АП»	https://vk.com/doc171747733_600721918?hash=b08dc958c85ebd9682&dl=2909b207c044c0cedd
Видео «Определе-ние антибиотико-чувствитель-ности бактерий»	https://vk.com/club203934598?z=video-203934598_456239046%2Fbaaa19456609edaae1%2Fpl_wall_-203934598
Презентация «Определе-ние чувствитель-ности»	https://vk.com/doc171747733_600726862?hash=cb43bcb137011d60be&dl=95a073ede2a72bfd99

 

Ход занятия

1.     Вводная часть

1.1. Организационный момент

Проверьте записи по теме и цели занятия. 

1.2. Мотивация занятия

Перед назначением курса антибиотикотерапии очень важно провести исследование микрофлоры больного на чувствительность к антибиотикам, т.к.:

1.     антибиотик, назначенный без данного исследования, может быть неэффективен в отношении микрофлоры больного – состояние больного ухудшится;

2.     антибиотик может вызвать привыкание микроорганизмов;

3.     антибиотик может вызвать дисбактериоз;

4.     антибиотик может вызвать аллергическую реакцию;

5.     антибиотик может оказать токсическое действие на органы и ткани (печень, почки и др.).биологической безопасности при сборе  и транспортировке исследуемого материала.

1.3. Контроль исходного уровня знаний. 

Закончите предложения:

1.     Химиотерапия инфекционных заболеваний это…

2.     Избирательность действия ХТП это…

3.     Группы ХТП представлены …

4.     Спектр  действия это…

5.     Механизм  действия ХТП это…

6.     Механизм  действия β-лактам, гликопептидов - …

7.     Механизм  действия аминогликозидов, макролидов, тетрациклинов, оксазолидинонов, левомицетина - …

8.     Механизм  действия полиенов, полипептидов, липопептидов –…

9.     Механизм  действия рифампицинов, аминохинолинов -…

10. Синтетические ХТП представлены 1.., 2...,3..,4..,

11. По химической структуре антибиотики подразделяют на группы:

1-...,2 - ..,3 - …

12. По  способу получения различают антибиотики: 1..,2..,3..,

13. Природная устойчивость (резистентность) микроорганизмов к антибиотикам это…

14. Приобретенная устойчивость микроорганизмов к антибиотикам это…

15. Методы определение чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам следующие: 1.., 2.., 3..

 

2.     Основная часть – 130 минут.

 

2.1  Микроскопия колоний санитарных смывов.

Приготовьте  фиксированный препарат из колоний  санитарного смыва.

Проведите окрашивание по Граму.

Оставьте препарат для просушивания.

 

2.2  Изучение теоретического материала. Приложение 1, 2, 3

Внимательно прочитайте Приложения 1.

Приложение 1

«Общая характеристика ХТП»

Ø Химиопрепараты – это химические соединения, обладающие избирательным этиотропным действием.

Применение:  1. Химиотерапия.

                          2. Химиопрофилактика.

                          3. Химиосанация.

 

Ø Требования к химиопрепаратам.

 

1.     Максимальная терапевтическая эффективность

2.     Специфичность действия

3.     Минимальная токсичность для организма

 

Ø Основные группы химиотерапевтических препаратов ХТП.

 

Синтетические

Антибиотики

1.     Сульфаниламиды - сульфадиметоксин, сульфадимидин и др., а также комбинированные с триметопримом (ко-тримоксазол, бисептол) 2.     Нитрофураны - нитрофурал (фурацилин), фуразолидон 3.     Оксихинолины – нитроксолин 4.     Аминохинолины – хлорохин 5.     Хинолоны - налидиксовая кислота (невиграмон), ципрофлоксацин, левофлоксацин и др. 6.     Производные азолов: -         имидазола: миконазол, кетоконазол, изоконазол, клотримазол, эконазол, бифоназол, оксиконазол, бутоконазол. -         триазола: флуконазол, итраконазол, вориконазол. 7.     Аллиламины (производные N-метилнафталина): тербинафин, нафтифин. 8.     Оксазолидиноны - линезолид и др. 9.     Алкалоиды – противопаразитарные препараты (хинин – хинная кора против малярии).

Природные  соединения. Продукты  жизнедеятельности  микроорганизмов, растений, животных. Обладают  избирательной цитотоксичностью.  Синтетические  аналоги и гомологи . АБ происхождения: Животного: лизоцим, экмолин,  интерферон 1.     Растительного:  фитонциды (лук, чеснок), иманин, рафанин.  Хвойные породы, эвкалипт. 2.     Бактериального: Bacillus brevis – грамицидин (простой белок, так как он содержит всего пять различных аминокислот, причем каждая из них повторяется в цикле дважды),   Bacillus polymyxa  - полимиксины (сложные органические соединения, основа -  полипептид) Actinomycetales –аминогликозиды,  в молекуле два или более аминосахара, которые связаны гликозидными связями  с аминоциклитольным кольцом. Более  100 АБ, в этой группе, наиболее важные: стрептомицины, неомицины, фортимицины, канамицины, гентамицины 3.     Грибкового происхождения. Пенициллин, пенициллиноподобные препараты, цефалоспорины 4.     Полусинтетические препараты. Ампициллин, метициллин, оксациллин 5.     Чисто синтетические препараты. Синтетические пенициллины – самая большая группа препаратов в настоящее время.

 

Внимательно прочитайте Приложения  2.

Приложение 2

«Общая характеристика АБ»

Ø Виды действия  антибиотиков.

 

1.     Бактерицидное – вызывают гибель бактерий.

2.     Бактериостатическое – останавливают рост и развитие бактерий.

За единицу активности антибиотиков принимают то минимальное количество антибиотика, которое способно подавлять рост и размножение бактерий, измеряется в единицах действия (ЕД).

 

}  Спектр действия антибиотиков – это та группа микроорганизмов, в отношении которой антибиотик обладает активностью.

 

Ø Классификация антибиотиков по спектру действия.

~       Антибактериальные

Узкий

1.     Действующие на грамположительную флору.

2.     Действующие на грамотрицательную флору.

Широкий

А) полусинтетические пенициллины (ампициллин, карбенициллин).

Б) цефалоспорины.

В) аминогликозиды – стрептомицин, канамицин, гентамицин, мономицин (ототоксичные).

Г) тетрациклины, доксициклин, левомицетин.

~       Противогрибковые – нистатин, леворин, низорал, гризеофульвин и др.

~       Противотуберкулёзные – препараты ПАСК, изониазиды и др.

~       Противоопухолевые антибиотики – рубомицин, доксорубин, актиномицины, оливомицин.

~       Противовирусные препараты – интерферон, ремантадин, ацикловир, азидотимидин, амантадин и др.

 

Ø Механизм действия антибиотиков.

 

1.     Торможение синтеза клеточной стенки бактерий.

2.     Торможение функций ЦПМ.

3.     Ингибирование синтеза нуклеиновой кислоты.

4.     Ингибирование синтеза белка.

 

Ø М/о  вырабатывают лекарственную устойчивость ЛУ  к антибиотикам.

 

1.     ЛУ негенетического происхождения.

Для проявления активности антибактериальных веществ необходимо размножение м/о. Следовательно, метаболически неактивные (не размножающиеся) м/о  могут быть фенотипически резистентны к лекарствам. Если они начинают размножаться, то становятся чувствительны к лекарствам.

Метаболически неактивные м/о резистентны к лекарственным препаратам (например, микобактерии туберкулеза).

 

2.     ЛУ генетического происхождения.

1)    Мутации, приводящие к изменению структуры мишени в бактериальной клетке, на которую действует антибиотик.

2)    Изменение структуры субъединицы антибиотика или его разрушение.

3)    Активное выведение антибиотика из клетки.

4)    Внехромосомные факторы – плазмиды, несущие гены резистентности (плазмидные гены).

Кишечная палочка (представитель нормальной микрофлоры) имеет большое количество плазмидных факторов.

Коньюгация (обмен генетической информации и плазмидами) кишечной палочки с патогенной микрофлорой может приводить к лекарственной устойчивости патогенной микрофлоры.

5)    Межвидовая устойчивость между близкородственными видами.

 

Внимательно прочитайте Приложения 3.

Приложение 3

«Основные положения  антибиотикотерапия»

 

Ø Рациональная антибиотикотерапия.

 

1.     Основывается  на результатах бактериологической диагностики.

В клинической практике чувствительными к  АБ считаются, те микробы, на которых испытуемый  АБ, оказывает бактериостатическое или бактерицидное действие.

2.     Замена токсичных на менее токсичные, с учетом побочных эффектов и состояния здоровья больных (например при почечно-печеночной недостаточности).

3.     Учёт анамнеза  и проведение аллерготестов.

4.     АБ должен вводится таким путём и такой дозой, чтобы обеспечить максимальное действие, лечебную концентрацию и исключить вредное действие.

5.     После длительного лечения АБ необходимо провести коррекцию нормальной микрофлоры человека, особенно важно для детей (бифидумбактерин, лактобактерин).

6.     Комбинирование АБ между собой и др. препаратами для усиления эффекта и снижения побочных явлений.

 

Ø Побочные реакции.

 

1.     Прямое повреждающее действие.

-         токсичное – на кровь (анемии, агранулоцитозы)

-         органотропное – на почки, нервную систему, орган слуха и равновесия  (ототоксичные антибиотики) и др.

 

2.     Аллергические реакции – крапивница, дерматит, ринит, анафилактический шок др.

 

3.     Биологическое действие - нарушение нормальной микрофлоры человека – дисбактериоз, присоединение грибковых инфекций (грибок –Candida, заболевание – кандидоз).

Нормальная микрофлора кишечника также синтезирует витамины – после лечения антибиотиками  могут быть авитаминозы.

 

Ø Методы определения чувствительности бактерий к антибиотику.

 

1.     Метод дисков - качественный метод.

 

         На чашку Петри  с питательным агаром проводится сплошной посев микробной культуры. Затем на чашку накладывают диски антибиотиков на расстоянии друг от друга на 2см и от краёв чашки. На сутки - в термостат при t 37 °С.

         Через сутки оцениваем результат. Если микробы чувствительны к данному антибиотику, то вокруг дисков будет зона задержки роста (прозрачная). По диаметру зоны задержки роста определяют степень чувствительности микроба к антибиотикам.

-         Чувствительные – зона задержки роста м/о более 10 мм,

-         Малочувствительные - менее 10мм,

-         Устойчивые - полное отсутствие зоны задержки роста.

 

2.     Метод серийных разведений в жидкой среде (количественный метод)

 

Проводится сначала ряд серийных разведений антибиотиков в пробирках. Затем в каждую пробирку вносится жидкая питательная среда и микробная культура.

Результат оценивают по последней пробирке с тем разведением антибиотика, где произошла видимая задержка роста (прозрачная). С помощью этого метода определяется доза антибиотика, к которой микроб чувствителен.

 

3.     Метод дорожки по Флемингу (качественный метод).

 

На чашку Петри по середине наносится дорожка Флеминга с антибиотиком, затем делают посев микробной культуры, начиная от дорожки до края чашки.

Учёт результата:

-         чувствительные к антибиотику микробы начинают расти лишь на некотором расстоянии от дорожки.

-         нечувствительные растут до самого края дорожки.

 

 

2.3    Ответы на вопросы к Приложениям 1,2,3

 

Дайте ответы на следующие вопросы:

 

1.     Каким требованиям должны отвечать ХТП?

2.     Какие две основные группы ХТП?

3.     Перечислите ХТП сульфаниламидов.

4.     Перечислите ХТП  нитрофуранов.

5.     Перечислите ХТП  хинолонов.

6.     Перечислите ХТП  имидазолов.

7.     Перечислите ХТП триазолов.

8.      Перечислите АБ  животного происхождения.

9.     Перечислите АБ  бактериального происхождения.

10. Перечислите АБ  грибкового происхождения.

11.  Какие существуют виды действия АБ.

12.  Что означает спектр действия АБ?

13.  Как классифицируют АБ по спектру действия?

14.  Какие существуют виды лекарственной устойчивости м/о к лекарственным средствам?

15.  Чем обеспечивается лекарственная устойчивость генетического происхождения?

16.  На чем основывается    рациональная антибиотикотерапия?

17.  В какие основные группы объединяют  побочные реакции при антимикробной терапии?

18.  Перечислите основные методы определения чувствительности бактерий к антибиотику.

 

 

2.4 .  Изучение Приложение 4

Приложение 4

 

«Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков»

 

№	Что делать	Как делать
1.	Подготовка материалов и посуды для исследования.	1. Пронумеруйте флаконы с дисками антибиотиков, на которые вы будете проводить исследование. 2. Запишите в тетрадь  для практических занятий  список антибиотиков под номерами в виде столбика. 3. Карандашом по стеклу на дне чашки Петри с питательным агаром (чашки приготовлены заранее) подпишите цифры с номерами антибиотиков по кругу так, чтобы каждая цифра была на расстоянии 2 см от другой и от края чашки. 4. Подпишите свои инициалы на чашках.
2.	Подготовка  культуры исследуемых микроорганиз-мов для посева.	1. Налейте физраствор в пробирку. 2. Прокалите бактериальную петлю, остудите погружением в агар перед взятием колонии. 3. Возьмите аккуратно петлей колонию и размешайте ее в физрастворе.
3.	Посев исследуемой микробной культуры на чашки Петри.	1.     Вылейте физраствор на питательную среду. 2.     Круговыми движениями бактериальной петли аккуратно равномерно распределите физраствор по питательной среде- посев методом сплошного газона. 3.     Слейте лишнюю жидкость из чашки Петри  в дезинфицирующий раствор .
4.	Нанесение дисков антибиотиков.	1. Нанесите пинцетом диски с антибиотиками в чашки Петри на цифры, нанесенные на дне чашки ранее. 2. Придавите диски с антибиотиками к питательной среде. 3. Закройте чашки Петри и поставьте в термостат на сутки при температуре 37°С.

 

 

2.5  Самостоятельная работа по отработке навыков  проведения исследования по определению резистентности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузных  дисков.

 

Следуя алгоритму Приложения 4, проведите определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.

Сделайте в тетради необходимые записи.

 

 

3.     Заключительная часть – 30 минут

3.1   Составление   отчета по выполненной работе.

 

Составьте отчет по выполненной работе. Обсудите  проблемных вопросов

 

3.2  Ответы на итоговые вопросы.

 

Итоговые вопросы:

 

1. Какое явление лежит в основе действия антибиотиков?

2. Что такое антибиотики?

3. В чем выражается активность антибиотиков?

4. Назовите виды действия, которые антибиотики оказывают на бактерии?

5. Каковы источники получения антибиотиков?

6. Что такое спектр действия антибиотиков?

7. Когда нужно выделять культуры микробов из организма больных для определения чувствительности к антибиотикам?

8. Назовите механизмы действия антибиотиков?

9. Назовите методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

10. Что является критерием чувствительности бактерий

к антибиотикам при исследовании методом дисков?

11. Какие побочные реакции могут возникать в организме человека при антибиотикотерапии?

12. Назовите антибиотики растительного и животного происхождения

 

 

3.3  Подведение итогов.

Выслушайте общую оценку за практическое занятие.

 

Скачано с www.znanio.ru